文章目录

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.2 方法

    1.2.1 细胞转染及分组

    1.2.2 qRT-PCR检测胃癌细胞中miR-539-5p、TPX2mRNA表达水平

    1.2.3 Western印迹检测TPX2、CyclinD1、p21、p27、MMP-2、MMP-9、MMP-14的蛋白表达

    1.2.4 MTT检测胃癌细胞增殖

    1.2.5 Transwell实验检测胃癌细胞迁移及侵袭

    1.2.6 双荧光素酶报告基因实验

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 miR-539-5p和TPX2在胃癌细胞和正常胃黏膜上皮细胞中的表达

2.2 miR-539-5p过表达对胃癌MGC-803细胞增殖的影响

2.3 miR-539-5p过表达对胃癌MGC-803细胞迁移、侵袭的影响

2.4 抑制TPX2表达对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭的影响

2.5 miR-539-5p靶向调控TPX2的表达

2.6 TPX2过表达逆转了miR-539-5p过表达对MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭的作用

3 讨 论

文章摘要:目的探究微小RNA-539-5p（miR-539-5p）调控胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制。方法采用实时定量PCR与Western印迹分别检测胃癌细胞系MGC-803、MKN-45、AGS与正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中miR-539-5p、Xklp2靶蛋白（TPX2） mRNA及蛋白的表达。采用miR-539-5p mimics、si-TPX2及miR-539-5p、pcDNA-TPX2共转染胃癌MGC-803细胞。双荧光素酶报告基因实验验证miR-539-5p与TPX2的靶向关系。Western印迹检测细胞增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达。结果 miR-539-5p在胃癌细胞中比正常胃黏膜上皮细胞显著下调（P<0.05）;体外过表达miR-539-5p可抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进p21、p27表达,而抑制CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14表达;TPX2是miR-539-5p的靶基因,且miR-539-5p可负向调控TPX2的表达;下调TPX2表达较si-NC组胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力明显受到抑制;与miR-539-5p+pcDNA组比较,上调TPX2表达可回复miR-539-5p过表达对MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 miR-539-5p可通过下调TPX2表达而抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭,其可能作为未来胃癌治疗的潜在治疗靶点。

文章关键词:

论文分类号:R735.2